影響凝膠色譜圖的重要因素 由實(shí)驗得到的凝膠色譜圖,再結合標定線(xiàn)進(jìn)行分子量分布的計算。因而必須保持標定色譜柱和測定試樣對實(shí)驗條件的一致性,否則將會(huì )引起譜圖的位置、形狀、寬度的變化導致計算結果的誤差。另外實(shí)驗條件本身選擇不合適也會(huì )影響色譜圖。
a .流速
目前,凝膠色譜實(shí)驗中,一般直接記錄譜圖的淋出體積(或保留時(shí)間)作為計算參數。流速的變化將直接影響譜圖的淋出體積,1%的流速變化會(huì )引起分子量的誤差達8%。因此,要求輸液泵流速穩定在1%以?xún)。同樣?a href="http://www.d5tw3.cn/class36.html">記錄儀紙速恒定也很重要,需恒定在0.2%以?xún)取?
b .進(jìn)樣濃度
凝膠色譜圖與進(jìn)樣濃度有關(guān),隨著(zhù)進(jìn)樣濃度的增加,色譜圖后移,變寬甚至出現多峰。當分子量愈大,溶劑愈良好,流速愈大,分布愈寬時(shí),色譜圖的濃度依賴(lài)性表現愈明顯。一旦譜圖有了濃度依賴(lài)性,其后果是:所計算的分子量偏小,分布變寬、分離效率變差。因此配制高分子溶液時(shí),在檢測器靈敏度允許范圍內應盡可能低。當采用示差檢測器時(shí),
濁度計|
色度計|
粘度計|
折射計|
滴定儀|
密度計|
熱流計|
濃度計|
折射儀|
采樣儀| 如高分子與溶劑的折光指數差很小,必須配制較高濃度才能得到足夠的信號,這時(shí)為了消除濃度對峰位的影響,可采用不同濃度進(jìn)樣,然后,以峰位對濃度作圖,求得外推濃度至零時(shí)的峰值。此法只適用于低分子量(M < 5×105),因為在高分子量高濃度時(shí),峰值對濃度作圖為非線(xiàn)性的。
在凝膠色譜實(shí)驗中還有一個(gè)導致譜圖后移的是由大分子降解引起。當大分子流經(jīng)色譜柱時(shí)由于剪切作用產(chǎn)生降解,它隨流速增加而增加,故是機械降解。影響降解的因素很多,當分子量愈大、濃度愈高、溶劑性能愈差、色譜柱填料愈細、降解愈嚴重。為了消除色譜圖的濃度依賴(lài)性,有人曾采用θ溶劑,但從降解的角度來(lái)看是非常不利的。因此,對高分子量聚合物需綜合選擇實(shí)驗條件,盡可能選低濃度、低流速以確保結果的可靠。