排除色譜保存時(shí)間故障的方法 
保存時(shí)間不重現有兩種不同的情況：既保存時(shí)間漂移和保存時(shí)間波動(dòng)。前者是指保存時(shí)間僅沿單方向發(fā)生變化，而后者指保存時(shí)間無(wú)固定規律的波動(dòng)。將此兩種情況區分開(kāi)來(lái)對找到題目的原因往往很有幫助。如，保存時(shí)間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保存時(shí)間的無(wú)規律波動(dòng)。事實(shí)上，保存時(shí)間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化，酸堿計| 糖度計| 鹽度計| 酸堿度計| 電導計| 水分測定儀| 濁度計|如固定相流失（例如通過(guò)水解），色譜柱污染（由樣品或活動(dòng)相所致）等。保存時(shí)間漂移的幾種最常見(jiàn)的原因如下：
　　一色譜柱平衡
　　假如我們觀(guān)察到保存時(shí)間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用活動(dòng)相完全平衡。通常平衡需要10-20個(gè)柱體積的活動(dòng)相，但假如在活動(dòng)相中加進(jìn)少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長(cháng)的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱。
　　活動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于活動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保存時(shí)間的漂移。應留意：水是很輕易污染的活動(dòng)相成分。
　　二固定相穩定性
　　固定相的穩定性都是有限的，即使在推薦的PH范圍內使用，固定相也會(huì )慢慢水解。例如，硅膠基質(zhì)在pH為4時(shí)水解穩定性最好。水解速度與活動(dòng)相類(lèi)型和配體有關(guān)。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定；長(cháng)鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。
　　經(jīng)常清洗色譜柱亦會(huì )加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等
　　三色譜柱污染
　　保存時(shí)間漂移的另一個(gè)常見(jiàn)原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過(guò)濾器，它可以過(guò)濾并吸附活動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可以是：活動(dòng)相本身，活動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過(guò)實(shí)驗可判定污染的來(lái)源。
　　樣品中假如存在色譜柱上保存很強的組分，就可能是使保存時(shí)間漂移的潛伏根源。這些根源通常是樣品基質(zhì)。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類(lèi)脂類(lèi)化合物，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強保存組分具有較高的分子量，在此情況下，保存時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì )有反壓的增加�？梢酝ㄟ^(guò)使用固相提�。⊿PE）等樣品前處理方法來(lái)往除樣品基質(zhì)的影響。
　　避免色譜柱污染最簡(jiǎn)單的方法是防患于未然。相比之下，找到題目的所在并設計有效的清洗步驟以往除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但并非所有污染物都可以在活動(dòng)相中溶解。如THF可往除反相色譜柱中的很多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO經(jīng)常用于往除反相色譜柱中的蛋白。
　　使用保護柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。
　　四活動(dòng)相組成
　　活動(dòng)相組成的緩慢變化也是保存時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。如活動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用活動(dòng)相等。
　　五疏水坍塌　 
    當小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為活動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì )發(fā)生分離忽然喪失及被分析物質(zhì)保存明顯降低或完全不保存的現象，這就是疏水坍塌。此現象是由活動(dòng)相不浸潤固定相表面而致。拯救的辦法實(shí)現用含大量有機組分的活動(dòng)相浸潤固定相，再用高水含量的活動(dòng)相進(jìn)行平衡。由是色譜柱長(cháng)期儲存也會(huì )發(fā)生此現象。使用內嵌極性基團的反相色譜柱（如WatersSymmetryShieldRP色譜柱）或非端基封口的色譜柱（如WatersResolve色譜柱）也可避免發(fā)生坍塌。