檢測食品中三聚氰胺的幾種方法

固相萃取(SPE)方法

1 固相萃取(SPE)柱的選擇：
       三聚氰胺呈弱堿性(弱陽(yáng)離子化合物)，凈化過(guò)程一般選擇陽(yáng)離子交換柱�；旌闲偷年�(yáng)離子交換柱(PCX)通過(guò)將磺酸基團(-SO₃H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附劑上，具有陽(yáng)離子和反相兩種吸附機理，并具有以下優(yōu)點(diǎn)：
      1) 可通過(guò)兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。
      2) 批次重復性好。
      3) 回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

2 樣品前處理步驟：
2.1標準樣品配制：
       取50mg三聚氰胺標準品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標準溶液，使用時(shí)，以提取液(1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
2.2提�。�
       稱(chēng)取飼料/奶粉樣品5g (或牛奶10ml)，加入50ml 1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL 2%乙酸鉛溶液，超聲20min。然后取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過(guò)混合型陽(yáng)離子交換小柱(PCX)。
2.3凈化(PCX小柱，60mg/3mL) ：
      1) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
      2) 上樣：加入提取液3mL
      3) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；棄去淋洗液并將小柱抽干。
      4) 洗脫：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。
      5) 濃縮：50℃，氮氣吹干，20%甲醇/水定容至2mL。
2.4檢測：
        用HPLC-UV中國農業(yè)部頒標準檢測方法分析，測得PCX柱的回收率結果如下：

        由上表可以看出：用PCX柱凈化樣品，可以得到滿(mǎn)意的回收率。

HPLC-UV檢測方法

        三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品藥品監督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測方法和中國農業(yè)部頒部的三聚氰胺檢測方法，采用艾杰爾(Agela) Venusil ASB系列親水色譜柱，均能得到良好的結果，分析色譜圖如下：
1、三聚氰胺的FDA檢測方法
        色譜柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm
        緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0。
        流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85：15
        進(jìn)樣量：樣品用緩沖液溶解成約0.1mg/mL，進(jìn)10uL
        流 速：1.0mL/min
        柱 溫：40℃
        波 長(cháng)：240nm

2、三聚氰胺的中國農業(yè)部頒標準檢測方法
        色譜柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm
        緩沖液：10mM檸檬酸, 10mM庚烷磺酸鈉
        流動(dòng)相：緩沖溶液:乙腈=85:15
        進(jìn)樣量：樣品用緩沖液溶解成約0.1mg/mL，進(jìn)10uL
        流 速：1.0mL/min
        柱 溫：40℃
        波 長(cháng)：240nm

LC-MS參考方法

        由于HPLC-UV方法中，流動(dòng)相添加了離子對試劑，限制了液質(zhì)聯(lián)用方法的使用；但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，沒(méi)有良好的保留與分離。
        源于此問(wèn)題，艾杰爾科技公司自主開(kāi)發(fā)了新的方法，采用艾杰爾(Agela) Venusil ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離，參考方法如下：
        緩沖液：10mM NH4AC
        流動(dòng)相：緩沖液：ACN=95：5
        流 速：1.0mL/min
        進(jìn)樣量：先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進(jìn)10uL
        柱 溫：40℃
        波 長(cháng)：240nm