溶液的熒光強度
一.熒光強度與溶液濃度的關(guān)系
    熒光是由物質(zhì)吸收光能后發(fā)射而出，因此，溶液的熒光強度 F 和溶液吸收光能的程度以及物質(zhì)的熒光頻率有關(guān)：
                 F ∝（I0-It）→ F = K’（I0-It）                          (2)
   
K’ 為常數，取決于熒光物質(zhì)的量子效率F，根據L—B定律：
所以   F = K’ ( I0-I010-ebc) = K’ I0 ( 1-10-ebc)  = K’ I0 ( 1-e-2.303ebc )   (3)
    將式中 e-2.303ebc 展開(kāi)，得
   (4)
    當 2.303ebC￡ 0.05 時(shí)(濃度很小，溶液較稀時(shí))，上式括號內第一項以后的各項均可忽略不計，所以：    
F = K’I02.303ebc                        （5）
  對于一熒光物質(zhì)的稀溶液，當 I0 及 b 一定時(shí)，
F=K·c                         （6）
     即在低濃度（2.303ebc ￡ 0.05）時(shí)，溶液的熒光強度與熒光物質(zhì)的濃度呈（線(xiàn)性）正比關(guān)系。 濁度計| 色度計| 粘度計| 折射計| 滴定儀| 密度計| 熱流計| 濃度計| 折射儀| 采樣儀|
二. 定量分析方法
 1. 工作曲線(xiàn)法：
    配制一系列濃度梯度的待測物的標準溶液，同空白溶液，使樣經(jīng)過(guò)相同的處理之后分別測定熒光強度：Fs、F0、Fx，然后作（ Fs - F0）— c 曲線(xiàn)，根據（Fx–F0)，從工作曲線(xiàn)上求得待測物的濃度（或含量）。
 2. 直接比較法 ：
    如果熒光物質(zhì)溶液的工作曲線(xiàn)通過(guò)原點(diǎn)，就可選擇其線(xiàn)性范圍，用直接比較法進(jìn)行測定：      
       FsˉF0 = KcS ，   FxˉF0 = Kcx                                 （7）
三. 影響熒光強度的外界因素
 1.  激發(fā)光源：一般選用lex 最大
    但對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長(cháng)波長(cháng)，低 I0 及短時(shí)間光照
 2.  溫度：大多數分子在溫度升高時(shí)，分子與分子之間，分子與溶劑分子之間的碰撞頻率升高，非輻射能量轉移過(guò)程升高，F 降低，因此，降低溫度，有利于提高 F 。
 3.  溶液的 pH：帶有酸性或堿性環(huán)狀取代基的芳香組化合物的熒光一般都與 pH 值有關(guān)，有些化合物在離子狀態(tài)時(shí)不顯熒光。為此，在用熒光強度進(jìn)行定量測定時(shí)，嚴格控制溶液 pH值是非常重要的。
4. 溶劑：對π
—π共軛的熒光物質(zhì)
在極性溶劑中，∆E 減小↓→ 躍遷幾率升高↑ → F↑（波長(cháng)長(cháng)移）
溶劑粘度 ↓ → F↓
5. 內濾：當熒光波長(cháng)與熒光物質(zhì)或其它物質(zhì)的吸收峰相重疊時(shí)，將發(fā)生自吸收使熒光物質(zhì)的熒光強度下降，此現象稱(chēng) “內濾” 。
6. 散射光的影響（溶劑的二種散射）
（1）瑞利散射光：物質(zhì)（溶劑或其它分子）分子吸收光能后，躍遷到基態(tài)的較高振動(dòng)能級，在極短時(shí)間（10-12s）返回到原來(lái)的振動(dòng)能級并發(fā)出和原來(lái)吸收光相同波長(cháng)的光，這種光稱(chēng)為瑞利散射光。
（2）拉曼散射光：物質(zhì)分子吸收光能后，若電子返回到比原來(lái)能極稍高（或稍低）的振動(dòng)能級而發(fā)射的光稱(chēng)為拉曼散射光。
    瑞利散射光波長(cháng)與激發(fā)光波長(cháng)相同，拉曼散射與激發(fā)光波長(cháng)不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長(cháng)與激發(fā)光波長(cháng)無(wú)關(guān)，因此可以通過(guò)選擇適當的激發(fā)波長(cháng)將拉曼散射光與熒光分開(kāi)。
7. 熒光熄滅劑的影響：
    熒光熄滅：熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導致熒光強度降低的現象。
    熒光熄滅劑：引起熒光熄滅的物質(zhì)。
如：X-，重金屬離子、O2  、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。
    尤其是溶液中的溶解氧能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現象，因此，在較嚴格的熒光實(shí)驗中必須除O2 。
8. 表面活性劑的影響：提高熒光強度。