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有機質(zhì)譜儀在生命科學(xué)中的應用

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有機質(zhì)譜儀在生命科學(xué)中的應用 
生命科學(xué)是近年來(lái)最引人注目的學(xué)科之一。有機質(zhì)譜儀在生命科學(xué)中主要用于以下幾個(gè)方面。
a .利用穩定同位素標記示蹤劑研究人體代謝過(guò)程及代謝產(chǎn)物
  目前主要采用的方法是:用15N 標記的某些氨基酸、多肽或蛋白質(zhì),用13C標記的某些碳水化合物(糖、多肽或淀粉)及用15N 、13C或18O標記的某些藥物作為示蹤劑,用有機質(zhì)譜儀來(lái)檢測代謝過(guò)程中含,15N 、13C 和18O 的有機化合物。
  為研究腎病病人蛋白質(zhì)代謝,給腎病患者和正常人注射或口服15N 標記的甘氨酸,然后定時(shí)收集尿樣,用沉淀法除~去尿樣中的蛋白,經(jīng)三次脫脂后冷凍干燥,干燥后的樣品直接作電子轟擊電離質(zhì)譜。下圖是正常人服未標記的甘氨酸和服15N 標記的甘氨酸后尿樣的EI-MS 譜圖。選擇譜圖中尿素的分子離子峰(m / e 60)及其同位素峰(m / e 61)進(jìn)行測定。比較服用15N 標記甘氨酸后尿樣中m / e 61 與m / e 60 峰的強度比(離子強度比)與服用未標記甘氨酸后尿樣中m/e 61 與m/e 60 峰的強度比(離子強度比),可以測定尿樣中15N 含量,此15N 含量表示了尿素氮的生成率,是觀(guān)察蛋白質(zhì)代謝狀態(tài)的一個(gè)可靠指標,并以此來(lái)研究腎病患者的蛋白質(zhì)代謝情況。與此同時(shí),用此法研究了用黃芪和當歸治療腎病患者的蛋白質(zhì)代謝情況,為探討黃芪和當歸治療腎病的機理提供線(xiàn)索。



  口服13C 標記的葡萄糖,然后用有機質(zhì)譜儀測定4 小時(shí)內呼出氣中的13CO2含量可判斷糖尿病的輕重?诜13C-U-半乳糖制劑,然后測定并給出13CO2呼出曲線(xiàn)可以診斷早期肝硬化。
b .生物大分子的分析測定
  快原子轟擊電離質(zhì)譜(FAB-MS)是最早用于分析測定生物大分子的質(zhì)譜技術(shù),Barker 等人于80 年代初提出了用快原子轟擊電離源分析多膚中氨基酸序列。陳耀祖也曾用快原子轟擊碰撞活化質(zhì)譜法分析糖甙結構獲得成功。但FAB-MS 對分子量達數萬(wàn)至數十萬(wàn)的生物大分子則無(wú)能為力。1958 年德國F . Hillenkamp 、美國J . Fenn 分別發(fā)表了用基體輔助激光解吸質(zhì)譜法( MALD-MS)和電噴霧離子源四極質(zhì)譜(ESI-MS)分析大分子蛋白質(zhì)的報告,實(shí)現了生物大分子質(zhì)譜分析的重大突破。這兩種質(zhì)譜法都能對分子量高達幾十萬(wàn)的生物大分子進(jìn)行快速(幾分鐘一個(gè)樣品)、精確(士0.1 %)和高靈敏度(10-15mol)的測定。
  下圖是胰島素混合物的基體輔助激光解吸飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALD-TOF-MS)譜圖。底物為二經(jīng)基苯甲酸,圖中a 為胰島素,b 為肌紅蛋白,c 為細胞色素。



  下圖為小牛血清白蛋白的電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)譜圖。圖(a)為小牛血清白蛋白在電噴霧電離時(shí)形成的一系列多電荷離子質(zhì)譜圖,電荷數為30~60 ;圖(b)為通過(guò)計算機重疊合方法處理后得到的小牛血清白蛋白質(zhì)譜圖。由此得到小牛血清白蛋白的分子量為66430.0~66709.0。




  下圖圖15是一些分子量不同的蛋白質(zhì)的锎-252 等離子解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(252Cf ? PD-TOF-MS)譜圖。其中(a)是牛胰島素,分子量為5733 ;(b)為核糖核酸酶,分子量為13687 ;(c)為α-干擾素,分子量為19273。



c .藥物結構鑒定及藥物代謝研究
  在藥物結構鑒定方面,可以通過(guò)各種“軟”電離技術(shù),得到被鑒定藥物的分子離子峰(或準分子離子峰),從而得到該藥物的分子量信息。作高分辨質(zhì)譜,可以得到被鑒定藥物的元素組成-分子式。再結合質(zhì)譜中的碎片離子和IR 、NMR 、UV 等提供的結構信息,就可以推斷該藥物的結構。如劉運愛(ài)等用EI 電離、正離子FAB 和負離子FAB 等質(zhì)譜技術(shù)研究并給出了五種甘草次酸衍生物的結構。
  在藥物及其代謝產(chǎn)物分析中,廣泛使用了色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。Gadzinowicz , B.J .等編著(zhù)的《氣相色譜一質(zhì)譜分析藥物和代謝產(chǎn)物》一書(shū)中詳細地敘述了中樞神經(jīng)系統興奮劑、止痛劑、局麻劑、抗菌素及治療心血管病,抗高血壓、低血糖和治療甲狀腺病所用藥物及代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜分析。
發(fā)布人:2010/11/26 10:19:001231 發(fā)布時(shí)間:2010/11/26 10:19:00 此新聞已被瀏覽:1231次